产品货号：
RFT078
中文名称：
小分子蛋白电泳试剂盒
英文名称：
Small molecule protein electrophoresis Kit
产品规格：
10次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒含有超低分子量蛋白电泳（多肽电泳）全套试剂，可以用来检测1～20kD的多肽大小。
保存：按标签指示条件保存，有效期1年。
本试剂盒可配制至少10块常规大小的PAGE胶(8×10cm)。
一、10% APS配制
10% APS配制-5mL：将APS干粉溶于5mL灭菌水中，彻底溶解后分装，1mL/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少常温存放时间，以防失效。10% APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的10% APS。
二、制胶
三、电泳
四、QuickLan蛋白染色液
缓冲液配方：
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- 适用范围广：2×多肽电泳缓冲液和2×PAA溶液中不含有SDS，适用于多肽的变性和非变性电泳。
- 分辨率高：凝胶缓冲液独特配方，可以有效分离1～5kD多肽。
- 使用方便：配制凝胶时只需1:1混合2×凝胶缓冲液和2×PAA溶液，加上APS和TEMED即可配制凝胶。
| 组分 | 规格 | 保存 |
| 2×多肽电泳浓缩胶缓冲液 | 15mL | 4℃ |
| 2×多肽电泳分离胶缓冲液 | 30mL | |
| 2×PAA溶液(超低浓缩胶用) | 15mL | |
| 2×PAA溶液(超低分离胶用) | 30mL | |
| TEMED | 0.5mL | |
| 10% APS(干粉) | 5mL | 室温 |
| 10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(干粉) | 500mL | |
| QuickLan蛋白染色液 | 500mL | |
| 2×Tricine多肽上样缓冲液(变性，还原) | 1mL | -20℃ |
保存：按标签指示条件保存，有效期1年。
本试剂盒可配制至少10块常规大小的PAGE胶(8×10cm)。
- 常规染色所需的漂洗，固定，脱色步骤都无必要。
- 本染色液可以重复利用1～2次，敏感性会有轻微下降，请延长染色时间。
- 本染色液有轻微腐蚀性，请带手套操作。使用后，请盖好瓶盖，常温密封保存。
一、10% APS配制
10% APS配制-5mL：将APS干粉溶于5mL灭菌水中，彻底溶解后分装，1mL/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少常温存放时间，以防失效。10% APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的10% APS。
二、制胶
- 配制分离胶
- 按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯中混合；立即混匀5～10秒，以使溶液充分混匀。
表一：一块厚度1mm的mini胶用量成分 分离胶 浓缩胶 18％T/5mL 5％T/2mL 2×多肽电泳浓缩胶缓冲液 / 1mL 2×多肽电泳分离胶缓冲液 2.5mL / 2×PAA溶液(超低浓缩胶用) / 1mL 2×PAA溶液(超低分离胶用) 2.5mL / 10％ APS 30～50μL 20～30μL TEMED 3～5μL 2～3μL - 如非必须，不要使用厚度1.5mm的凝胶，这样会增加电泳后染色的时间。尽量使用厚度0.75m和1mm的凝胶。
- 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据表二的标准条件调节催化剂的加入量。
环境温度 20℃ 25℃ 分离胶配制 浓缩胶配制 分离胶配制 浓缩胶配制 分离胶配制量 5mL - 5mL - 浓缩胶配制量 - 2mL - 2mL 10%APS 50μL 30μL 30μL 20μL TEMED 5μL 3μL 3μL 2μL 凝固时间 5～10分钟 20～30分钟 5～10分钟 20～30分钟 - 如非必须，不要使用厚度1.5mm的凝胶，这样会增加电泳后染色的时间。尽量使用厚度0.75m和1mm的凝胶。
- 在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5cm即可。
- 此溶液为过量，请勿全部注入。
- 沿玻璃板缓慢加入适量无水乙醇覆盖于下层胶之上。
- 常温25℃静置5～10分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
- 按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯中混合；立即混匀5～10秒，以使溶液充分混匀。
- 配制浓缩胶：
- 去除覆盖在分离胶上的乙醇层，用滤纸将残留的乙醇吸去。
- 按照表一将不同成分加入到小烧杯中，立即混匀5～10秒，以使溶液充分混匀。
- 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
- 常温25℃静置30～40分钟待凝胶聚合。
- 去除覆盖在分离胶上的乙醇层，用滤纸将残留的乙醇吸去。
三、电泳
- 10×Tris-Tricine-SDS缓冲液配制：将10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(干粉)置于干净的烧杯中，加入500mL超纯水，彻底搅拌混匀，不要调节pH，即配成500mL 10×TTS缓冲液。电泳前，稀释10倍配成1×TTS缓冲液。
- 样品处理：待上样的检测样品与2×Tricine多肽上样缓冲液等体积混合，95℃处理5分钟后上样。蛋白Marker一般已经含有上样缓冲液，根据说明书上样(预染Marker不能加热处理，非预染Marker上样前一般要95℃处理5分钟)。
- 电泳：将电泳槽的内槽加满1×TTS缓冲液，轻柔拔出梳子，用1mL移液器将梳孔吹洗干净，将Marker或蛋白样品加入点样孔，稳压电泳(下表)，至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5～3个小时。
恒电压 150V 起始电流 60-75mA/板胶 结束电流 15-25mA/板胶 电泳时间 2.5+小时
四、QuickLan蛋白染色液
- 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，用适量蒸馏水漂洗，去除胶表面的SDS，残余SDS会导致染色液出现沉淀。
- 弃蒸馏水，加入适量染色液(以刚刚覆盖过胶面为适)，摇床上常温摇动，根据下表确定染色时间。
待检测蛋白量 染色时间 ＞1μg 2分钟 100ng～1μg 10～20分钟 10ng～100ng 30～60分钟
缓冲液配方：
- 10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(1L)
- 配方：1M Tris，1M Tricine，1% SDS，pH8.3。
- 配制方法：
成分 含量 Tris base 121.1g Tricine 179.2g SDS 10g ddH2O 至1L
- 2×Tricine蛋白样品加样缓冲液（10mL）
- 配方：100mM Tris-HCl(pH6.8)，24% glycerol，8% SDS，0.2M DTT，0.02%考马斯亮蓝G-250。
- 配制方法：
注：混匀分装-20℃贮存备用成分 含量 1M Tris-Cl,pH6.8 1mL 甘油 2.4mL SDS 0.8g DTT 0.31g 考马斯亮蓝G-250 2mg 灭菌ddH2O 定容至10mL
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